±¸Ã¼Àû HPLC ºÐ¼® Á¶°Ç(Ä÷³/¿ë¸Å/°ËÃâ±â) ¹× ³í¹®º° ºÐ¸® Å©·Î¸¶Åä±×·¥ »ç·Ê
✅ 1️Polyamines (Spermidine, Spermine)
🔬 HPLC ºÐ¼® >Á¶°Ç (´ëÇ¥)
Ç׸ñ
Á¶°Ç
Ä÷³
C18 ¿ª»ó Ä÷³ (ex: > Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, 4.6 ¡¿ 150 mm, 5 ¥ìm)
À̵¿»ó(Mobile Phase)
A: 50 mM KH©üPO©þ (pH 6.8) + 5% ACN > B: ACN:MeOH:Water (45:45:10)
±×¶óµð¾ðÆ®
0–10 min: 10% B ¡æ 70% B (¼±Çü)
À¯¼Ó (Flow rate)
1.0 mL/min
ÁÖÀÔ·®
20 ¥ìL
°ËÃâ±â
FLD (Çü±¤ °ËÃâ, ex: > Ex 340 nm / Em 445 nm)
ÆÄ»ýÈ ½Ã¾à
OPA (Ortho-Phthalaldehyde), FMOC-Cl > (Fluorenylmethyloxycarbonyl chloride)
Àüó¸®
½Ã·á ³» polyamineÀº > OPA/FMOC·Î À¯µµÃ¼È (15ºÐ ¹ÝÀÀ) ÈÄ > ÁÖÀÔ
🔖 ¹®Çå >¿¹½Ã
✅ 2️⃣ Retinol (ºñŸ¹Î A)
C18 ¿ª»ó Ä÷³ (Waters > Symmetry C18, 4.6 ¡¿ 250 mm, 5 ¥ìm)
À̵¿»ó
MeOH:Water (95:5, v/v) + 0.1% BHT (»êÈ > ¹æÁö)
À¯¼Ó
UV °ËÃâ (¥ë = 325 > nm)
Çí»ê:EtOH ÃßÃâ ¡æ SPE > (Silica) Á¤Á¦ ¡æ ³óÃà
✅ 3️⃣ Arachidonic Acid (PUFA)
C18 ¿ª»ó Ä÷³ > (Phenomenex Luna C18(2), 4.6 ¡¿ 250 mm, 5 ¥ìm)
A: Water + 0.1% H©ýPO©þ > B: ACN:MeOH (85:15, v/v)
0–30 min: 50% B ¡æ 100% B
UV °ËÃâ (¥ë = 205 > nm)
ÆÄ»ýÈ
FAMEs À¯µµÃ¼È > (BF©ý-MeOH, 60¡É, 30ºÐ)
Çí»ê ÃßÃâ ¡æ FAMEs ¡æ Á¤Á¦ ÈÄ ÁÖÀÔ
✅ 4️⃣ ´ãÁó»ê >(Hyodeoxycholic acid µî)
C18 ¿ª»ó Ä÷³ (Waters > XBridge C18, 4.6 ¡¿ 150 mm, 5 ¥ìm)
A: 10 mM KH©üPO©þ (pH 2.5) > B: ACN
0–20 min: 30% B ¡æ 70% B
UV °ËÃâ (¥ë = 210 > nm) ¶Ç´Â ELSD
SPE Á¤Á¦, ´ãÁó»ê Na-salt·Î Àüȯ
Ion-pairing
Sodium heptanesulfonate (0.005 M) °¡²û > ÷°¡
✅ 5️⃣ ÀúºÐÀÚ ÆéŸÀ̵å
C18 ¿ª»ó Ä÷³ (Vydac > C18, 4.6 ¡¿ 250 mm, 5 ¥ìm)
A: 0.1% TFA in Water > B: 0.1% TFA in ACN
0–30 min: 5% B ¡æ 50% B
UV °ËÃâ (¥ë = 220 > nm)
Alcalase ó¸® ¡æ 10 > kDa ÀÌÇÏ ultrafiltration
ºÐ¼® Ư¡
ºÐȹº° RT ±â·Ï ¡æ LC–MS > ¿¬µ¿ °¡´É